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人促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒使用说明书

发布时间:2017-05-31 20:33:53 分类:行业新闻 来源: 点击:

人促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒使用说明书 人促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒使用说明书   本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相干液体样本中促性腺激素释放激素(GnRH)的含量。  实验原理:  本试剂盒利用双抗体夹心法测定标本中人促性腺激素释放激素(GnRH)水平。用纯化的人促性腺激素释放激素(GnRH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次加入促性腺激素释放激素(GnRH),再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的促性腺激素释放激素(GnRH)呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人促性腺激素释放激素(GnRH)浓度。  试剂盒组成:  试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保

  本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相干液体样本中促性腺激素释放激素(GnRH)的含量hd单翼跌落实验机。

  实灯管式耐黄变实验机验原理:

  本试剂盒利用双抗体夹心法测定标本中人促性腺激素释放激素(GnRH)水平。用纯化的人促性腺激素释放激素(GnRH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次加入促性腺激素释放激素(GnRH),再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的促性腺激素释放激素(GnRH)呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人促性腺激素释放激素(GnRH)浓度。

  试剂盒组成:

  试剂盒组成 48混凝土排水管内水压实验机孔配置 96孔配置 保存

  说明书 1份 1份

  封板膜 2片(48) 2片(96)

  密封袋 1个 1个

  酶标包被板 1×48 1×96 2⑻℃保存

  标准品:90ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2⑻℃保存

  标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 纸箱环压实验机2⑻℃保存

  酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2⑻℃保存

  样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2⑻℃保存

  显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2⑻℃保存

  显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2⑻℃保存

  终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2⑻℃保存

  浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2⑻℃保存

  样本处理及要求:

  1.血清:室温血液自然凝固10⑵0分鞋子曲折防水实验机钟,离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清,保存进程中如出现沉淀,应再次离心。

  2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10⑵0分钟后,离心2岩石压剪实验机0分钟左右(2000⑶000转万能电子拉力实验机/分)。仔细搜集上清,保存进程中如有沉淀构成,应当再次离心。

  3.尿液:用无菌管搜集,离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清,保存进程中如有沉淀构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

  4.细胞培养上清:检测分泌性的成分时,用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清。检测细胞内的成分时,用PBS(PH7.2⑺.4)稀释细胞悬液,细胞浓度到达100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成分。离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清。保存进程中如有沉淀构成,应再次离心。

  5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入1定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本熔化后依然保持2⑻℃的温度。加入1定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。ye2000c压力实验机仔细搜集上清。分装后1份待检测,其余冷冻备用。

  6.标本收集后尽早进行提取,提取按相干文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行实验,可将标本放于⑵0℃保存,但应避免反复冻融.

  7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步骤:

  1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第1、第2孔中分别加标准品100μl,然后在第1、第2孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第1孔、第2孔中各取100μl分别加到第3孔和第4孔,再在第3、第4孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第3孔和第4孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第5、第6孔中,再在第5、第6孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第5、第6孔中各取50μl分别加到第7、第8孔中,再在第7、第8孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第7、第8孔中分别取50μl4点曲折疲劳实验机加到第9、第10孔中,再在第9第10孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第9第10孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为60ng/L,40ng/L ,无塑性转变落锤冲击实验机20ng/L,10ng/L,5ng/L。

  2. 加样:分别设空白孔(空白对比孔不加样品及酶标试剂,其余各摇摆实验机步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽可能不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

  5. 洗涤:谨慎揭掉封板膜,弃去液体,甩干,铜棒万能实验机每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  7. 温育:操作同3。

  8. 洗涤:操作同5。

  9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

  10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟之内进行。

  注意事项:

  1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15⑶0分钟后方可以使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3.各步加样均应使用加样器,并常常校订其准确性,以免实验误差。1次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物资含量太高(样本OD值大于标准品孔第1孔的OD值),请先用样品稀释液稀释1定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

  5. 封板膜只限1次性使用,以免交叉污染。

  6. 底物请避光保存。

  7. 严格依照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准.

  8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按沾染物处理。

  9. 本试剂不同批号组分不得混用。

  10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

  计算:

 全自动3轴实验机 以标准物的浓度为横电脑卧式拉力实验机坐标,OD值为纵坐标,在座标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入椅子扶手靠背综合实验机方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

  试剂盒性能:

  1.样品线性回归与预期浓度相干系数R值为0.95以上。

  2.批内与批见应分别小于9%和11%

  检测范围:

  3ng/L⑻0ng/L

  保存条件及有效期:

  1.试剂盒保存:;2⑻℃。

  2.有效期:6个月

人促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒使用说明书