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人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒

发布时间:2017-05-31 20:08:28 分类:行业新闻 来源: 点击:

人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒 人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒 人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒说明书人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒仅供研究使用检测范围:1.56 U/L - 100 U/L预期利用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相干生物液体中AST含量。说明:1.试剂盒保存:⑵0℃(较长时间不用时);2⑻℃(频繁使用时)。2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。3.中、英文说明书可能会有不1致的地方,请以英文说明书为准。4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少量水样物资,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。实验原理:用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗AST抗体的微孔中顺次加入标本或标准品、生物素化的抗AST抗体、HRP标记的亲和素,经过完全洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化 人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒说明书人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒仅供人造板万能实验机研究使用检健身器材实验机测范围:1.56 弹性耐久实验机U/L - 100 U/L预期利用:ELISA法定量测定人拉链疲劳实验机血清、血浆、细胞培养上清或其它相干生物液体中AST含量。说明:1.试剂盒保存:⑵0℃(较长时间不用时);2-线材拉力实验机8℃(频繁使用时)。2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。3.中、英文说明书可能会有不1致的地方,请以英文说明书为准。4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少量水样物资,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。实验原理:用软管耐压爆破实验机纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗AST抗体的微孔中依金属材料冲击实验机次加入标本或标准品、生物素化的抗AST抗体、HRP标记的亲和素,经过完全洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的AST呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate ):1块(96孔)。2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。3.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Dil包装箱紧缩实验机uent):1×10ml/瓶。6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。9.浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10.终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。需要而未提供的试剂和器材:1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热撕裂实验机恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调理移液器及吸头,1次检测样品较多时,最好用多通道移液器6.蒸馏水,容量瓶等标本的收集及保存:1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清便可检测,或将标本放于⑵0℃或⑻0℃保存,但应避免反复冻融。2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本收集后30分钟内于2⑻°C 1000g离心15分钟,或将标汽车电线刮磨实验机本放于⑵0℃或⑻0℃保存,但应避免反复冻融。3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清便可检测,或将标本放于⑵0℃或⑻0℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则:首先通过文献检索的方岩石直剪实验机式了解待测样本的大致含量,肯定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的进程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100 U/L,做系列倍比稀释后,分别稀释托辊旋转阻力实验机100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,1.56 U/L,样品稀释液直接作为标准浓度0 U/L,临用前15分钟内配制。如配制50 U/L标准品:取0.5ml(不要少复合式环境实验机于0.5ml)100 U/L的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀便可,其余浓度以此类推。生物素标记抗体的稀释原则:临用前以生物素标记抗曲轴曲折疲劳实验机体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前1小时内配制。辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:拉扭组合实验机临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例泡沫拉伸实验机配制,轻轻混匀,在使用前1小时内配制。操作步骤:实验开始前,请提早配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽可能避免起泡。每次检测都应当做标准曲线。如样品浓度太高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽可能不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前1小时内配制),37℃,60分钟。3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡纸张破裂强度实验机1⑵分钟,200μl/每孔,甩干。4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 1耐寒实验机00μl静载荷堆码实验机,37℃,60分钟。5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次耐破强度实验机浸泡1⑵分钟,200μl/每孔,甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3⑷孔有明显的梯度蓝色,后3⑷孔显色不明显,便可终止)。7.依序每孔加终止溶液50清华大学疲劳实验机μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽可能与底物液的加入钢绞线实验机顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序丈量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟之内进行检测。注:1.用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数trtf1型高频感应热疲劳实验机分钟,以便试剂集中到管底。2.每次实验留1孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。丈量时先用此孔调OD值至零。3.为避免样品蒸发,实验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。4.未使用完的酶标板或试剂,请于2⑻℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧蒸煮实验机化物酶标记亲和素工作液请根据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准汽车板簧疲劳实验机品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素塑料燃烧实验机工作液。5.建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。洗板方法:自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验进程中。手工洗板方法:吸去(不2箱式冷热冲击实验机可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液最少0.3ml注入孔内,浸泡1⑵分钟。根据需要,重复此进程数次。计算:以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出ballonring实验机相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项:1.洗涤进程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。2.1次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。3.如标本中待测物资含量太高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。4.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。5.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。6.当混合蛋白溶液时应尽可能轻缓,避免起泡。7.底物请避光保存。8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。9.本试剂盒可同时检测天然或重组的电子力学实验机人AST,且与其他相干蛋白无交叉反应。10.有效期:6个月 人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒