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大鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒说明书

发布时间:2017-05-31 22:51:58 分类:新闻动态 来源: 点击:

大鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒说明书 大鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒说明书   预期利用  ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相干生物液体中白介素4(IL⑷)含量。  实验原理  用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗IL⑷抗体的微孔中顺次加入标本或标准品、生物素化的抗IL⑷抗体、HRP标记的亲和素,经过完全洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的IL⑷呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。  试剂盒组成及试剂配制  1. 酶联板:1块(96孔)  2. 标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1,000pg/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀

  预期利用

  ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相干生物液体中白介素4(IL⑷)含量。

  实验原理

  用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗IL⑷抗体的微孔中顺次加入标本或标准品、生物素化的抗IL⑷抗体、HRP标记的亲和素,经过完全洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的IL⑷呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

  试剂盒组成及试剂配制

  1. 酶联板:1块(96孔)

  2. 标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1,000pg/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释1,000 pg/ml,500 pg/ml,250pg/ml,125 pg/ml,62.5 pg/ml,31.2 pg/ml,15.6 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml,临用前15分钟内配制。如配制500 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)1,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀便可,其余浓度以此类推。推。

  3. 样品稀释液:1×20ml。

  4. 检测稀释液A:1×10ml。

  5. 检测稀释液B:1×10ml。

  6. 检测溶液A:1×120μl(1:100)钢筋反复曲折实验机临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前1小时内配制。

  7. 检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

  8. 底物溶液:1×10ml/瓶。

  9. 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀数显万能材料实验机释25倍。

  10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

  11. 覆膜:5张

  12. 使用说明书:1份

  自备物品

  1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提早预热)

  2. 微量加液器及吸头,EP管

  3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸

电子土工布强力综合实验机  标本的收集及保存

  1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 xg离心20分钟,取上清便可检测,或将标本放于⑵0℃或⑻0℃保存,但应避免反复冻融。

  2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本收集后30分钟纸板环压强度实验机内于2 - 8° C 1000 xg离心15分钟,或将标本放于⑵0℃或⑻0℃保存,但应避免反复冻融。

  3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清便可检测,或将标本放于⑵0℃或⑻0℃保存,但应避免反复冻融。

  注:以上标本置半自动轮胎漏气实验机4℃保存应小于1周,⑵0℃或⑻0℃均应密封保存,⑵0℃不应超过1个月,⑻0℃不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

  操作步骤

  实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽可能避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度太高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

  1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽可能不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

  2. 弃去液体,塑料管环刚度实验机甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前1小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

  3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1⑵分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

  4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液手动万能材料实验机) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

  5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1⑵分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

  6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3⑷孔有明显的梯度兰色,后3⑷孔梯度不明显,便可终止)。

  7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽可能与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

  8. 用酶联仪在450nm波长依序丈量各孔的光密度(磨察力实验机OD值)。 在加终止液后立即进行检测。

  注:

  1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前到达室温,使用后请立即依照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用1次性的吸头,避免交叉污染。

  2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 /标准品,酶结合物或底物时,第1个孔与最后1个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会致使不同的“预孵育”时间,从而明显地影响到丈量值的准确性及重复性。1次加样时间(包括标准品及所有样品)最好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。

  3. 孵育:为避免样品蒸发,实验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以免液体蒸发矿用电缆曲折实验机;洗板后应尽快进行下步操作,任什么时候侯都应避全自动燃烧实验机免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵照给定的孵育时间和温度。

  4. 洗涤:洗涤进程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶标仪读数。

  5. 试剂配制:Detection A及DetectionB在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请根据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请精确配置标准品及工作液,尽可能不要微量配置(如吸取检测溶液A时,1次不要小于10μl),以免由于不准确稀释而酿成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

  6. 反应时间的控制:加入底物后请定时视察反应孔的色彩变化(比如,每隔10分钟),如色彩较深,请提早加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

  7. 底物:底物请避光保存,在贮存和温育时避免强光直接照耀。

  建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。

  如标本中待测物资含量太高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。

  洗板方法

  1. 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体中管曲折实验机;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液最少0.3ml注入孔内,浸泡1⑵分钟,根据需要,重复此进程数次。

  2. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用气臂式跌落实验机后再用到正式实验进程中。

  特异性

  本试剂盒可同时检测重组或天然的大鼠IL⑷,且与其它相干蛋白无交叉反应。

  计算

  以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标),OD值为横坐标(对数坐标),在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如cur不干胶剥离强度实验机veexpert1.3,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

  检测范围:15.6 pg/ml - 1,000 pg/ml

  最低检测限:3.9 pg/ml

  说明

  1. 在贮存及孵育进程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以避免蒸发和污染,试剂避免遭到微生物的污染,由于蛋白水解酶的干扰将致使出现毛病的结果。

  2. 试剂盒保存:短时间(1周之内)以标签上的标示为准,长时间保存请将试剂全部保存于⑵0℃。

  3. 浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。

  4. 刚开启的酶联板孔中可能会有少量水样物资,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。

  5. 所有的样品都应管理好高低温实验机,依照规定的程序处理样品和检测装置。

  6. 有效期:6个月。

大鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒说明书 液压万能实验机